芦荟通畅胶囊的遗传毒性研究.doc

1、 芦荟通畅胶囊的遗传毒性研究摘要：目的 评价芦荟通畅胶囊的遗传毒性；方法 采取小鼠淋巴瘤TK基因突变试验（Mouse Lymphoma assay TK gene mutation test）、鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验(Salmonella Typhimuriun / Reverse mutation assay，Ames Assay)以及骨髓细胞微核试验评价芦荟通畅胶囊的遗传毒性。设芦荟通畅胶囊提取液剂量组20、10、5、2.5、1.25mg/皿，在添加S9和不添加S9条件下，通过Ames试验和TK试验对其进行体外遗传毒性评价；设芦荟通畅胶囊混悬液剂量组0.25、0.125、0.0625

2、g/ml，通过骨髓细胞微核试验对其进行遗传毒性评价。Ames试验中，设置计数TA97a、TA98、TA100、TA102四个标准测试。菌株在四个浓度下，于37、48 h培养后回复突变菌落数；MLA试验中，计算大小集落的孔数、平板效率PE %、基因突变频率MF和小集落百分率SC%；骨髓细胞微核试验中，每只动物计数1000个嗜多染红细胞，其微核发生率以含微核的PCE千分率计。结果芦荟通畅胶囊提取物Ames试验受试物各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照回变菌落数2倍，未出现剂量反应关系；MLA试验中，芦荟通畅胶囊提取物各剂量组MF值与溶剂对照组相比均无显著性差异，未出现剂量反应关系；骨髓细胞微核试验中

3、受试物各剂量组的微核发生率差异无显著性（P0.05），而雌雄小鼠阳性对照组均明显高于阴性对照组 (P 0.05), the male and female mice positive control group were significantly higher than the negative control group (P 0.01). Conclusion aloe relax capsule extract Ames test, MLA test and micronucleus test of bone marrow cells was not detected in genet

4、ic toxicity.Key words: Aloe relax capsule， Mouse lymphoma TK gene mutation test，Salmonella typhimurium/back mutation test， Bone marrow cells micronucleus tesI目 录摘要I-II1前言12 材料与仪器22.1样品22.2主要仪器与试剂22.3 实验动物23 方法33.1 样品制备33.2 剂量选择与受试物给予方式33.3 小鼠淋巴瘤TK基因突变实验（MLA试验）43.4 鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验（Ames试验）63.5 骨髓微核试验74

5、 结果84.1 MLA实验结果84.2 Ames实验结果94.3骨髓微核试验结果105 讨论11参考文献13综述14致谢191前言中药芦荟被誉为本世纪最有希望的保健食品之一，被用作许多保健品的材料中。芦荟通畅胶囊中含有芦荟、大豆膳食纤维、西洋参、荷叶等主要成分，其中以芦荟为主要成分。芦荟（学名：Aloe vera）芦荟属，为百合科多年生常绿草本植物。芦荟是集食用、药用、美容、观赏于一身植物新星。芦荟具有预防和治疗各种疾病的功效。如芦荟素具有高效的健胃整肠的功效, 并能提高新陈代谢的速度, 使人的皮肤变得美丽。芦荟肉质部分含有芦荟熊果甙，芦荟熊果甙除了可以预防继父老化外, 对胃及十二指肠等溃疡、

6、粘膜溃烂也有明显的治疗成效。芦荟熊果甙可防止肌肉组织的瘢痕化,使皮肤组织迅速恢复原状。芦荟中的芦荟酊是抗菌性很强的物质, 具有直接杀菌作用。芦荟中的芦荟咪酊具有抗癌症的作用, 能破坏癌变细胞。芦荟中的芦荟乌鲁辛对溃疡有很好的疗效, 能治疗胃及十二指肠溃疡病。荷叶为睡莲科草本植物莲的叶片。其药用作用：荷叶味苦辛微涩、性凉性味寒凉,伤脾胃,归心、肝、脾经。清香升散；具有消暑利湿，健脾升阳，散瘀止血的功效。主治暑热烦渴，头痛眩晕，水肿，食少腹胀，泻痢，白带，脱肛，吐血，衄血，咯血，便血，崩漏，产后恶露不净，损伤瘀血。1西洋参（学名：Panax quinquefolius）是五加科人参属多年生草本植物

7、，其主要作用为增强中枢神经系统功能、保护心血管功能、提高免疫力、促进血液活力、治疗糖尿病、补肺降火、养胃生津的功能。 近年来，中药保健品安全问题日渐突出，中药保健品引起的DNA损伤和染色体畸变突变以及癌变需要得到重视。芦荟畅通胶囊作为一种常用中药食用保健品，与其遗传毒性相关方面的研究还没见报道。通常一种遗传毒性检查方法只能检测出少数遗传学终点，并不能检测出所有的遗传学终点，一般要采取多组互补是试验进行遗传毒性评价。小鼠淋巴瘤TK基因突变试验中小鼠淋巴瘤细胞L5178Y 是TK基因突变实验的经典靶细胞，不仅能检测出点突变，对染色体水平及大的缺失等基因突变也能检测出来4。鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试

8、验（Ames试验）是从原核水平上检测基因突变最常用方法，具有周期短、简便、敏感、经济，且适用于测试混合物，反映多种物质的综合效应，是遗传毒性试验的奠基石。采用Ames试验及MLA试验组合对受试物的遗传毒性进行检测，是一种比较全面的检测方法。骨髓细胞微核试验受试物采用间隔24h两次经口灌胃法进行骨髓细胞微核试验，验证其体内骨髓细胞微核试验致突变作用。2 材料与仪器2.1样品芦荟通畅胶囊，广州市美澳健生物科技有限公司生产，硬胶囊，0.4g每粒，内容物为灰黄色粉末，阴凉干燥处保存。人体推荐用法为每日口服1次，每次2粒，以体重60kg计，则人体每日最大服用量为13.3mgkg-1 BW。2.2主要仪器

9、与试剂电子天平（UX4200H型、BP210D型、BS2202S、BT125D型、BS2202S型）；细胞计数仪(Singapore BIO-RAD Laboratories,inc,型号TC10)；Leica DMLS型偏光显微镜；低速离心机；液氮罐；洁净工作台；恒温培养箱；恒温水浴锅；蒸汽压力锅；经鉴定生物学特性符合要求的L5178Y tk+/-3.7.2C小鼠淋巴瘤细胞，来源：武汉大学；经鉴定生物学特性符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100和TA102四株试验菌株，来源：武汉大学；甲醇；二甲基亚砜（DMSO）；Na2HPO412H2O；NaH2PO42H2O

10、35.6g；氯化钾溶液（1.65molL-1）；氯化镁溶液（0.4molL-1）；葡萄糖-6-磷酸钠溶液（0.05molL-1）；辅酶-II溶液（0.025molL-1）；肝S-9液；Giemsa染液；磷酸二氢钾；磷酸二氢钠马血清（批号：8178916，Gibco），Invitrogen Corporation公司产品）；辅酶-II（批号:38277，SIGMA公司生产）；葡萄糖-6-磷酸钠盐（批号:75720，SIGMA公司生产）；三氟胸苷（TFT）（批号：28256，SIGMA公司生产）。2.3 实验动物SPF级NIH小鼠，50只，雌雄各半，体重25g30g，动物和饲料均由广东省医学实验动物中心提供。3 方法3.1 样品制备3.1.1 MLA实验样品制备根