金番止泻胶囊提取物不同比例药效对比研究.doc

1、金番止泻胶囊提取物不同比例药效对比研究摘要：目的 金番止泻胶囊系用水、醇提取番石榴叶、金樱根、茯苓获得其多糖、鞣质、总黄酮等有效部位，按不同比例混合，评价其有效性及安全性，进行药效对比研究，筛选出最佳比例。方法 采用番泻叶所致腹泻模型，观察自拟药方番樱止泻胶囊提取物不同比例对番泻叶所致腹泻的预防和治疗作用；应用醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进，以及将棉球植入小鼠皮下形成肉芽肿的方法，观察番樱止泻胶囊有效部位不同比例的抗炎作用；以急性毒性实验研究其安全性；通过金番止泻胶囊有效部位不同比例混合对枯草杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌等4种常见临床细菌进行纸片扩散法、试管稀释法实验，研究比较

2、不同比例混合药物的抑菌作用。结果 三种比例混合药物对番泻叶所致腹泻均有预防与治疗效果，抗炎效果显著，丙组比例最佳。 三种比例混合药物对金黄色葡萄球菌，伤寒杆菌有抑制作用，丙比例具有较强杀菌作用。 结论 甲乙丙比例混合药物均有止泻、抗炎、抑菌药效，丙比例组（A:B:C:D=4:4:0.2:4）为最佳比例。关键词： 多糖；鞣质；总黄酮；止泻；抗炎；体外抑菌A comparative study of Pharmacology and efficacy of A comparative study of Pharmacology and efficacy of different mixed rad

3、io among the effective composition of JinFan untiarrheal capsuleAbstract: Objective To study the the effective parts of polysaccharide, ta-nnins, flavonoids from JinFan antidiarrheal capsule with water, alcohol extrac- tion of Psidium guajava leafs, Rafdix Rosa Laevigata, poria cocos. This sub- ject

4、 research accord- ing to the different mixing ratio effective parts, and com-pare the pharmacological efficacy conresearch,and selected the best proportion. Methods The secretory diarrhoea model was made with Cassia Angustifolia Extract to o-bserve their anti-diarrhea effect. The anti-inflammatory a

5、ctivities were tested u-sing various inflammatory models including the permeability in- crease of blood capillary by HAc in mice,and the cotton-pellet granuloma of the mice.ByJinFa-n antidiarrhealcapsuleeffectivepartsofdifferentmixingratio ofbacillussubtili-s,e.coliands.aureusandotherfourkindsofcomm

6、onclinicalbac-teriawerediscdiff-usionmethodexperiment.Results Three proportion mixed me- dicine for diarrhea caused by senna have prevention and therapeutic effect.Thr-ee proportion mixed medicine have powerful anti-inflammatorypropertiesand C group works best.Ar-mour ethylene-propylene group have i

7、nhibit the growth of bacteria and C grou-p of sterilization ability is strongest. Conclusion C group （A:B:C:D=4:4:0.2:4） as the best mix pro-portion.Keywords: polysaccharides, tannin, totalflavonoids, cure of Diarrhea, anti-inflammatory, bacteriostasis in vitro.I目 录摘要- 1前言11.1腹泻研究现状11.2金樱根、番石榴叶、茯苓概况

8、12材料与仪器22.1材料22.2仪器23 方法33.1药物制备33.2止泻实验33.3 抗炎实验43.4抑菌实验53.5 药物安全性评价74结果74.1抗腹泻作用比较74.2 抗炎作用比较84.3 抗菌作用比较94.4急性毒性135讨论155.1 止泻、抗炎结果分析155.2体外抑菌实验结果分析156结论16参考文献16综 述17参考文献23致 谢241前言1.1腹泻研究现状腹泻（diarrhea)是一种临床常见病、多发病，分急性和慢性两类。急性腹泻是由多种不同原因(如细菌感染、毒素作用、化学物质刺激等)引起的肠道急性弥漫性炎症。为常见急症之一,四季皆可发生, 夏秋之际发病率较高, 以大便次

9、数增多,粪质清稀或如水样为其临床特征1。慢性腹泻指病程在两个月以上或间歇性在24周内的复发性腹泻，可见于肠道感染性疾病、肠道非感染性炎症、小肠吸收不良和运动性腹泻等2。目前治疗腹泻，一般医院首选抗生素进行治疗，许多腹泻患者也自行选择抗生素，由于滥用抗生素引起的二重感染增多, 抗生素毒副作用也导致疾病的不断出现3，随着临床上抗生素的滥用，加速了肠道病原菌耐药性的产生，给临床治疗带来困难。吸附剂、或抑制肠蠕动的药物，同时采用补液疗法辅助，以防脱水，虽然可以减轻症状，对于肠道非感染炎症有好的疗效，但对于感染性腹泻患者疗效有待观察4，且治标不不治本。中医治疗腹泻可以在辨证基础上对症治疗，综合协同，对疾

10、病实现早期干预，减轻患者症状，减弱病原体毒素对人体脏腑器官的损害，具有显著疗效，中药复方治疗腹泻以葛根黄芩黄连汤临床运用较为广泛5，另还有白头翁汤等，但组方都过于复杂，基本上含有八种以上，甚至十五种以上的药材，原料成本高、制备工艺复杂，不利于稳定性、质量的控制。总之，目前并无治疗腹泻的特效药可用。1.2金樱根、番石榴叶、茯苓概况 金樱根为蔷薇科植物金樱子（Rosa laevigata Michx）的根, 性平, 味酸涩, 有固精涩肠作用, 主治遗精、遗尿、痢疾泄泻、崩漏带下、子宫脱垂、痔疮、烫伤等6，临床报道其可治疗细菌性痢疾、小儿脱肛等，水煎剂对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌有很强的抑制

11、作用，很强抗噬菌体作用7。番石榴（Psidium guajava Linn）为常绿灌木或小乔木，系桃金娘科植物8，番石榴叶为番石榴的干燥叶及带叶嫩枝，民间常用番石榴叶辅助降糖，治疗急慢性肠炎、痢疾等疾病。番石榴叶提取物通过琼脂平板抑菌实验9发现其对沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用。茯苓（Wolfiporia cocos(Schw.) Ryv.&Gibn）是一种真菌类中药，多寄生于松科植物赤松或马尾松等树根上。味甘、淡、平，归心、脾、肾经，具有利水渗湿、健脾和胃、宁心安神等功效。茯苓的主要化学分为多糖，三萜，脂肪酸等，100%水煎剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌等均有抑制作用

12、10。1.3本论文研究的意义 金番止泻胶囊选用了我国资源丰富的番石榴叶、金樱根、茯苓三种药材为原料，用水、乙醇提取番石榴叶、金樱根、茯苓，获得其多糖、鞣质、总黄酮等有效部位。方中药味数较少，制备工艺简单，原料成本较低，利于稳定性、质量的控制。2材料与仪器2.1材料 金樱根药材（批号：20131015，广州致信中药饮片有限公司)、番石榴叶药材（批号：20131015，广州致信中药饮片有限公司）、茯苓药材（批号：20130702，广州康圣药业有限公司）、番泻叶药材（批号：20091101，广州致信中药饮片有限公司）经广东药学院高级检验师田素英鉴定；黄连小檗碱片（国药准字H37021111，青岛黄海

13、制药有限责任公司）；注射用硫酸链霉素（国药准字H20054140，深圳华药南方制药有限公司）；戊巴比妥钠（批号：020919，北京化学试剂公司）阿司匹林（国药准字J20130078，拜尔医药保健有限公司）；乙醇（批号：20130110，CP，天津市富宇精细化工有限公司）；乙酸（批号：20130210，天津市富宇精细化工有限公司）；KM小鼠由广东省中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(粤)2014-1002。2.2仪器KQ-500型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV1102紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司)；SHZ-D()循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂)；

14、CP225D型电子天平（德国Sartorius公司上海恒平科学仪器有限公司）；AUY220型电子天平（广州仪通仪器仪表有限公司）；JA2003电子天平（上海恒平科学仪器有限公司）；电热鼓风恒温干燥箱（上海讯能电热设备有限公司）；DFY-400摇摆式高速中药粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；HWS26型电热恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司，HWS26型）。3 方法3.1药物制备金樱根乙醇、水提取物制备：金樱根适量，2次煎煮，每次用8倍水煎煮1h，过滤，合并滤液，浓缩得稠浸膏，再用乙醇（95%）热回流提取，过滤，浓缩、回收乙醇至稠浸膏，合并水、乙醇所提稠浸膏（记为A）。番石榴叶乙醇水提取物制备：方

15、法同金樱根,得稠浸膏（记B)；番石榴叶挥发油制备：番石榴叶适量，水蒸气蒸馏法提取挥发油（记C)。茯苓水提物制备：茯苓适量（粉碎），加水煎煮2次，每次10倍量、煎煮一小时，过滤，合并滤液，浓缩成稠浸膏(记D）。将各提取物稠浸膏按甲比例（A:B:C:D=4:3:0.2:2）、乙比例（A:B:C:D=5:4:0.2:2）、丙比例（A:B:C:D=4:4:0.2:4）混合用蒸馏水配置成适宜浓度。3.2止泻实验3.2.1预防番泻叶所致腹泻取1822g小鼠50只，随机分成5 组, 每组10 只, 雌雄各半。即: 空白对照组、甲比例药物组（A:B:C:D=4:3:0.2:2）、乙比例药物组（A:B:C:D=5:4:0.2:2）、丙比例药物组（A:B:C:D=4:4:0.2:4）盐酸黄连素组。将以上各组动物称重标记后, 各比例药物组和盐酸黄连素组以0. 2 mL/ 10 g 灌胃药液，对照灌胃生理盐水,灌胃后正常饮食，连续7d,末次给药后30min后，分别灌胃番泻叶2gkg-1,(1 mL 相当于0.3g生药材),然后将小鼠单个放在垫有吸水纸的鼠笼内, 每隔1h换垫纸, 从灌胃番泻叶水浸液时开始计时，