新雪胶囊的质量标准提高研究.doc

1、新雪胶囊的质量标准提高研究 摘要：目的 提高新雪胶囊的质量标准。方法 建立穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定方法并进行方法学考察，对检测条件和供试品的前处理方法等统一研究，考察所建立含量测定限度的合理性。结果 制定新雪胶囊含量测定方法，确定其含量限度。结论 新建立的新雪胶囊含量测定方法快速、简便，重现性好，为新雪胶囊质量标准提高工作奠定基础。关键词：新雪胶囊；标准提高；含量测定；高效液相色谱法注：本论文题目来源于教师的国家药典标准提高项目，项目编号为： 272 。Study on improving the quality standards of Xinxue capsulesAb

2、stract：Objective To improve the quality standards of Xinxue capsules. Methods To establish the content determination method and for methodology inspection about the Paniculta lactone and the dehydration paniculta lactone. To unified research the test conditions and the test samples pretreatment meth

3、ods. To inspection the rationality about the content of the established limits. Results To develop the content determination method about the Xinxue capsules and determine the content of its limit. Conclution The newly established content determination method of Xinxue capsules is easy， quick， and g

4、ood reproducibility. It is to lay a good foundation for the Xinxue capsules quality standard work.Keywords：Xinxue capsules， Standards to improve， Content determination， HPLCI3目 录摘要-1前言12材料与仪器22.1仪器与试剂22.2样品收集情况23方法与结果23.1色谱条件的摸索33.2前处理方法的探索53.3方法学的考察73.4样品含量测定123.5样品含量限度的确定134讨论14参考文献16综述17致谢241 前言新

5、雪胶囊由14味药组成，主要用于邪热内陷，心神被扰所致的壮热神昏、烦躁谵语，热极生风而致的痉厥、颈项强直。处方中用寒水石、石膏等大寒之品清热为君药，竹叶卷心、升麻、人工牛黄、穿心莲清热解毒，磁石重镇安神为臣药，沉香行气开窍， 珍珠层粉 、硝石泻热散结为佐药。诸药合用有清热解毒、开窍宁神、各种热性病之发热、重镇息风之功效。 状标准的研究情况粒剂，目前“新雪胶囊”为“新雪颗粒”同处方不同剂型的仿制品种，新雪颗粒为原研剂型，目前质量标准收载于中国药典2010版一部1。新雪胶囊分别执行国家食品药品监督管理局颁布的两个企业注册标准，注册标准号为YBZ25542005（辽宁先臻制药有限公司）、YBZ1207

6、2006-2010Z（江苏同禾药业有限公司），两个企业的质量标准在处方量、工艺制法、检验项目上均存在一定差异。该品种“20102011年度国家药品标准提高工作（中药）科研立项任务单”的要求为：参考中国药典2010年版一部收载的原研品种“新雪颗粒”质量标准，建立穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定方法并进行方法学考察或验证原穿心莲的含量测定方法，对检测条件和供试品的前处理方法等统一研究，考察所建立含量测定限度的合理性。现行的两个企业注册标准中均有含量测定项，江苏同禾药业有限公司的注册标准中含量测定项为HPLC法测定穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总量；辽宁先臻制药有限公司的注册标准中含

7、量测定项为HPLC法测定栀子中栀子苷的含量。现按照该品种“科研立项任务单”的要求，本着系列品种质量标准靠齐的原则2-3，参考中国药典2010年版一部“新雪颗粒”含量测定项下方法，同时，以有大量文献4-10证明使用高效液相色谱法测定穿心莲含量适用性高。因此，本次实验采用高效液相色谱法测定穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，并进行了相应的方法学考察。2 材料与仪器2.1仪器与试剂仪器：岛津 LC-10AT VP高效液相色谱仪，岛津 SPD-M10A VP 检测器，CLASS-VP工作站；Agilent1260液相色谱仪，VWU紫外检测器，1260 series高效液相色谱工作站；电子分析天平

8、METTLER TOLEDO XS204；超声波清洗器。穿心内莲酯对照品（批号110797-201108，含量以98.7%计，购自中国药品生物制品检定研究院）；脱水穿心莲内酯对照品（批号110854-201308，含量以99.7%计，置五氧化二磷减压干燥器中减压干燥12小时后使用，购自中国药品生物制品检定研究院）。中性氧化铝：200300目，批号140922，上海五四化学试剂有限公司。试剂：甲醇为色谱纯；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。2.2 样品收集情况新雪胶囊目前全国有2家企业生产，分别为辽宁先臻制药有限公司（国药准字Z20050717）和江苏万禾制药有限公司（国药准字20080037）。

9、本次试验收到企业提供的样品共7批，样品收集情况见表1。表 1 样品收集情况生产企业样品批号规格辽宁先臻制药有限公司110701；110402；1104010.5g/粒江苏万禾制药有限公司110402；100310；110401；1103090.35g/粒3 方法与结果新雪颗粒的含量测定法：含量测定 照高效液相色谱法（中国药典2010版一部附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（55：45）为流动相；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2000。对照品溶液的制备 取穿

10、心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含穿心莲内酯16g和脱水穿心莲内酯24g的混合溶液，即得。供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心20分钟（3000转/分钟），精密量取上清液5ml，加在中性氧化铝柱（200300目，4g，内径为1.5cm）上，用甲醇20ml洗脱，收集洗脱液，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液20l，供试品溶液2

11、0l，注入液相色谱仪，测定，即得。参考次测定方法，进行一下摸索。3.1 色谱条件的摸索3.1.1检测波长的选择在二极管阵列检测器上提取对照品及供试品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯色谱峰在200400nm波长范围的紫外光谱扫描图，结果显示穿心莲内酯在225nm波长处有最大吸收（见图1），脱水穿心莲内酯在254nm波长处有最大吸收（见图2，供试品中穿心莲内酯峰与脱水穿心莲内酯峰紫外光谱扫描图与穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品的光谱扫描图一致（见图3和4），与中国药典2010年版一部“新雪颗粒”含量测定项下检测波长一致，故选择穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。225n

12、m225nm 图1 穿心莲内酯对照品峰紫外光谱扫描图 图2 供试品中穿心莲内酯峰紫外光谱扫描图254nm254nm 图3 脱水穿心莲内酯对照品峰紫外光谱扫描图 图4 供试品中脱水穿心莲内酯峰紫外光谱扫描图3.1.2 流动相的选择 参考中国药典2010年版一部 “新雪颗粒”含量测定项下方法，采用甲醇-水（5545）为流动相。供试品色谱图中，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯保留时间分别为8分钟和20分钟，基线相对平稳，阴性样品无干扰，分析时间也较合理，故选用甲醇-水（5545）为流动相。3.1.3 柱温的选择 本试验通过同一份供试品溶液（批号110309）进样20l，考察了流动相为甲醇-水（5545）时

13、，柱温分别为20、25、30、35、40的待测色谱峰的保留情况。观察各色谱图可知，各柱温条件下各色谱图的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰分离度良好，理论塔板数均在5000以上，峰面积积分值相近。可见柱温对新雪胶囊的含量测定影响不显著。综合考虑，本试验选择柱温35。3.1.4 系统适用性试验 色谱柱：Phenomenex Luna C18 (2504.6mm， 5m)，No: 696223-7；柱温：35；流动相：甲醇-水（55：45），流速：1.0ml/min；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算，结果见表2。考虑到不同色谱

14、柱的差异，标准正文将理论板数定为均应不低于4000。3.1.5 色谱柱的考察 分别采用不同品牌的色谱柱，按标准正文含量测定项下的色谱条件测定同一供试品溶液（批号：110402），结果见表2。色谱柱分别为 Phenomenex Luna C18 (2504.6mm，5m)， NO:696223-7； Ecosil C18 (2504.6mm，5m) ，NO: 9AC41106； CAPCELL C18 (2004.6mm，5m)，NO:120V-17结果显示所选用的三种色谱柱均能达到系统适用性的要求。考虑到不同色谱柱的差异，标准正文将理论板数定为均应不低于4000。表2 不同色谱柱的比较色谱柱穿心莲内酯保留时间（min）脱水穿心莲内酯保留时间（min）穿心莲内酯理论塔板数脱水穿心莲内酯理论塔板数穿心莲内酯含量（mg/粒）脱水穿心莲内酯含量（mg/粒）总量（mg/粒）7.819.68000130000.1870.5040.697.620.7620070000.1