GC法同时测定痤疮散中3种成分的含量.doc

1、GC法同时测定痤疮散中3种成分的含量摘要：目的 建立毛细管气相色谱法同时测定痤疮散中百秋李醇、薄荷脑和冰片的含量。方法 采用气相色谱法，DB-FFAP（30m0.32mm0.25um)毛细管色谱柱分离测定，FID检测器。进样口温度为250，检测器温度为280，载气为氮气，流速1.24 mLmin-1。色谱柱采用程序升温，初始温度100，保持5min，再以5min-1的升温速率升至250。分流比10:1，进样量1L，以水杨酸甲酯为内标进行定量。结果 百秋李醇、薄荷脑、冰片（龙脑和异龙脑）在同一色谱条件下获得分离，均在测定范围内呈良好的线性关系，加样回收率分别为102.03%、103.15%、10

2、0.10%，RSD分别为0.73%、0.52%、2.66%（n=6），均符合要求。结论 该法简便、准确、灵敏度高，重现性好，适用于痤疮散的质量控制。关键词：气相色谱法；痤疮散；百秋李醇；薄荷脑；冰片；含量测定Simultaneous Determination of the Content of 3 Components in CuoChuang powder by GCAbstract：Objective To establish a method for the content determination of patchouli alcohol，method and synthetic

3、borneol in CuoChuang powder. Methods GC was applied to quantitative analysis. FID as detector and nitrogen as carrier gas， the experimented column was DB-FFAP(30m0.32mm0.25um)polar capillary column with split injection at the flow rate of 1.24 mLmin-1. The injector temperature was 250 and detector t

4、emperature was 280. Using temperature programmed，initial temperature was 100，and maintained around 5minutes，then heated to 250 at rate of 5min-1. Split ratio was 10:1，and injection volume was 1L . Methyl salicylate as internal standard. Results The linear ranges of camphor ，patchouli alcohol，method

5、，synthetic borneol (isoborneol and borneol)were respectively. The average recoveries were 102.03%(RSD=0.73%，n=6)，103.15%(RSD=0.52%，n=6) and 100.10%(RSD=2.66%，n=6)，respectively. Conclusion It is an accurate，simple，rapid，qualitative method with good reproducibility for the determination of menthol in

6、CuoChuang powder by GC method .Keywords：GC，CuoChuang powder，Patchouli alcohol，method，synthetic borneol，Intermediate testing目 录摘要III1 前言32 材料与仪器52.1 仪器52.2 药品与试剂53 方法与结果53.1 溶液的制备53.2 色谱条件63.3 专属性试验63.4 线性关系考察93.5 色谱柱考察113.6重复性试验133.7 稳定性考察153.8 加样回收率试验153.9 样品含量测定174 讨论17参考文献20综述22致谢31附录321 前言气相色谱（g

7、as chromatography，GC）是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。这是一种新的分离、分析技术，它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广应用。GC色谱的发展与下面两个方面的发展是密不可分的。一是气相色谱分离技术的发展，二是其他学科和技术的发展。气相色谱法具有以下几个突出的优点：（1） 应用范围广，能分析气体、液体和固体。（2） 灵敏度高，可测的痕量物质，可进行mg级的定量分析，进样量可在1mg以下。（3） 分析速度快，仅用几分钟至几十分钟就可完成一次分析，操作简单。（4） 选择性高，可分离性能相近物质和多组分混合物。另外，还有操作稍有失误不会损伤仪器、试样分析费用低

8、等特点。所以，气相色谱法在环境监测中得到广泛的应用。痤疮散为深圳市中医院的医院制剂，标准号：粤ZB20111564（Z）。痤疮散属于中药复方制剂，处方包括白芷、防风、广藿香、大黄、冰片、薄荷、密陀僧、硫磺、黄连等9味中药。其中广藿香为唇形科刺蕊草属植物广藿香Pogostemoncabl in(Blanco)Benth. 的干燥地上部分。原产于菲律宾，现分布于广东海南、广西、台湾、云南等省区，均为栽培。为芳香化湿中药，功能主治：芳香化湿；和胃止呕；祛暑解表。主湿阻中焦之脘腹痞闵；食欲不振；呕吐；泄泻；外感暑湿之寒热头痛；湿温初起的发热身困；胸闵恶心；鼻渊；手足癣。挥发油为广藿香的主要活性成分，关

9、于其化学成分的报道很多，其主要成分有百秋李醇、广藿香酮、丁香烯、广藿香烯、愈创木烯等1。薄荷为唇形科薄荷属植物薄荷Mentha haplocalyx Briq. 的干燥全草。是中华常用中药之一。它是辛凉性发汗解热药，治流行性感冒、头疼、目赤、身热、咽喉、牙床肿痛等症状。外用可治神经痛、皮肤瘙痒、皮疹和湿疹等。薄荷脑（Menthol）又称薄荷冰是一种化学药剂，薄荷脑系由薄荷的叶和茎中所提取，白色晶体，分子式C10H20，为薄荷和欧薄荷精油中的主要成分，是从薄荷油中提取的一种饱和的环状醇。薄荷脑能刺激人们皮肤或黏膜产生清凉感以减轻不适之痛。对深部血管也可以引起收缩而产生治疗作用。目前在中药成方制剂

10、中应用较广，常入散剂、片剂、丸剂、胶囊剂和橡胶膏软胶囊剂等。因此，为保证产品质量，有必要对中药成方制剂中薄荷脑含量进行质量控制，建立准确、可靠的检验方法。薄荷脑的测定方法，目前较多使用分光光度计、旋光法和气相色谱法等2-5。冰片为龙脑香科植物龙脑香Dryobalanops aromatica Gaerth.f. 树脂的加工品，分为天然冰片和合成冰片，主要成分为龙脑、异龙脑和樟脑等6 。是常用中药，历史悠久，具有开窍醒神、清热止痛等功效，用于热病神昏，痉厥，中风痰厥，气郁暴厥，中恶昏迷，目赤，口疮，咽喉肿痛，耳道流脓。不少名贵中成药都将其作为主要组成药物之一，因其具有挥发性、易升华，含量易受生产

11、条件、包装、运输、贮存条件的影响，很多含有冰片的中成药都未对此制定明确的质量检测方法和标准。痤疮散的原标准仅收载了黄连、大黄、防风显微鉴别，未收载对广藿香、薄荷、冰片等药味进行质量控制的检测方法。目前，其他制剂中采用GC法测定百秋李醇、薄荷脑和冰片的含量已有文献报道。本试验用毛细管气相色谱（GC）法测定痤疮散中3种成分的含量，能有较好的分离度和较高的理论塔板数。本方法操作简单、快速，结果准确，可用于痤疮散的质量控制 7。原药材在制成饮片、储存及制备工艺（提取、混合）过程中不可避免存在损失，油粒混合的均匀程度也存在差别，挥发油含量过低能否达到理论临床效果值得思考，中成药在我国临床用药占据重要地位

12、，成分复杂，有效成分不明确 8-9 。中药质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法是否适合于相应检测要求。在建立中药质量标准时，分析方需经验证；在处方、工艺等变更或改变原分析方法时，也需对分析方法进行验证。方法验证过程和结果均应记载在药品质量标准起草说明或修订说明中。 需验证的分析项目有：鉴别试验、限量检查和含量测定，以及其他需控制部分（如残留物、添加剂等）的测定。中药制剂溶出度、释放度等检查中，其溶出量等检测方法也应作必要验证。 验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。应视具体方法拟订验证的内容10。2 材料与仪器2.1 仪

13、器气相色谱仪：GC-2010Plus（日本岛津），包括FID 检测器和GC-2010色谱工作站（日本岛津）。色谱柱：（1）DB-FFAP（30m0.32mm0.25um)毛细管柱；（2）DB-WAX(30m0.32mm0.25um)毛细管柱；（3）CP-WAX52CB (25mm0.32mm1.20um)毛细管柱。天平：XS205(瑞士梅特勒)。2.2 药品与试剂试剂：乙酸乙酯等均为分析纯；试验用水为超纯水。试药：水杨酸甲酯对照品（批号：110707-201011），百秋李醇对照品（批号：110772-201206），薄荷脑对照品（批号：110728-200506），冰片对照品（批号：1107

14、43-200905）均购于中国食品药品检定研究院。收集深圳市中医院生产的3批样品供研究用，批号分别为20131024，20131025，20131028。3 方法与结果3.1 溶液的制备3.1.1 内标溶液精密量取水杨酸甲酯对照品50L，置50mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，制成1LmL-1的内标液。3.1.2 对照品溶液精密称取百秋李醇对照品、薄荷脑对照品、冰片对照品适量，加乙酸乙酯分别制成0.1mgmL-1、0.025mgmL-1和0.05mgmL-1的溶液，即得。3.1.3 供试品溶液取痤疮散10g，精密称定，置500mL 圆底烧瓶中，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录 D）试

15、验，自测定器上端加水至充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再加乙酸乙酯4mL，连接回流冷凝管，加热并保持微沸5小时，放冷，待溶液分层清晰后，分取乙酸乙酯液，置10mL量瓶中，用少量乙酸乙酯分次洗涤挥发油提取器内壁，乙酸乙酯洗液并同一量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。3.1.4 阴性对照样品溶液按处方及制法，制成分别缺广藿香、薄荷和冰片的阴性对照样品。取10g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液，按“3.1.3”项下方法制成阴性对照溶液。3.2 色谱条件色谱柱：DB-FFAP（30m0.32mm0.25um)毛细管色谱柱；柱温：采用程序升温，初始温度100，保留5min，再以5min-1升至250；检测器：FID检测器，进样口温度为250，检测器温度为280；载气为氮气，流速1.24 mLmin-1；氢气流速为50mLmin-1；空气流速为500mLmin-1；进样方式：分流进样，分流比10:1；进样量：1L。3.3 专属性试验阴性对照品溶液的制备：取按拟订处方和制法制备分别缺广藿香、薄荷和冰片阴性对照样品，照拟订供试液制备方法同法制备分别缺广藿香、薄荷和冰片的阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、阴性对照品溶液、供试品溶液各1L，注入气相色谱仪，按拟订方法测定。结果表明缺广藿香、薄荷