复方黑面神软膏的质量标准研究.doc

1、复方黑面神软膏的质量标准研究摘要：目的 提高复方黑面神软膏质量标准。方法 采用薄层色谱鉴别法对成分中的当黑面神、苦参、蛇床子、白鲜皮、地肤子进行定性鉴别，用高效液相色谱法测定黑面神中表儿茶素和苦参中苦参碱的含量。结果 在选定的薄层色谱条件下,色谱斑点清楚,分离效果好,无干扰；表儿茶素含量在0.00840.0336gl-1范围内呈良好的线性关系，r=1.000,测定的平均回收率为97.7%，RSD1.4%（n=6）；苦参碱含量在0.01470.0588gl-1范围内呈良好的线性关系，r=0.999,测定的平均回收率为97.6%，RSD1.5%（n=6）。结论 建立的定性、定量方法较简便、准确、灵

2、敏、重现性好。关键词：复方黑面神软膏；薄层鉴别；高效液相色谱法Study on the quality standards of compound Breynia fruticosa ointment Abstract: Objective: To improve the quality standards of compound Breynia fruticosa ointment. Methods: The Breynia fruticosa, Sophora flavescens,Fructus Cnidii, CORTEX DICTAMNI and Fructus Kochiae Sc

3、opariae radix were qualitatively identified by TLC. The content of L-Epicatechin in Breynia fruticosa and the content of matrine in Sophora flaves cens were determined byusing HPLC. Results: The spots on TLC plates were clear without interference in the blank reference.t The linearity range of Epica

4、techin IV was 0.00840.0336gl-1，r=1.000 . The linearity range of matrine IV was 0.01470.0588gl-1，r=0.999 . Conclusion: The established method is easy, accurate,sensitive, and reproducible. Keywords：Compound Breynia fruticosa Ointment，TLC，HPLCI目 录摘要-1 前言12 材料与仪器22.1 仪器22.2 试药23 方法33.1定性鉴别33.2含量测定94 讨论

5、174.1 定性鉴别结果174.2 定量鉴别结果175 结论18参考文献19综 述21致 谢291 前言随着社会的发展进步，大气环境、工业污染等多种因素的影响，导致人类皮肤病的患病率逐渐升高，所以关于其用药情况也在逐渐受到人们的关注。我们国家中医药里对皮肤病有着很多丰富的治疗经验和文字记载。福建药物志曰：“黑面神叶，百部各60g。水煎冲明矾适量，洗患处治漆过敏，湿疹；黑面神鲜叶适量，捣烂绞汁，调雄黄末涂患处治带状疱疹。”全国中草药汇编曰：“黑面叶适量，煮水坐盆或阴道冲洗，每日1次，治阴道炎、外阴瘙痒。”在现代临床应用中，神矾散（黑面神100g、白矾30g）祛风清热、消肿解毒、燥湿止痒，用于治疗

6、接触性皮炎、皮肤瘙痒、湿疹等皮肤病1。刘仲霞等2运用悬液定量杀菌试验方法对四种抗菌洗液杀菌效果进行随机抽样检测，结果显示，纯中草药制剂舒敛爽抗菌洗液（由黑面神、百部、荆芥、苦参、蛇床子、防风、地肤子和栀子组成）作用于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和淋病球菌5min，杀菌率可达100%。林挺等人3对醋酸去炎松霜与中药三七洗剂（黑面神、苦参、七大姑、蛇床子、野菊花、三亚苦、荆芥各30g，白鲜皮20g，布渣叶6g）治疗婴儿急性湿疹的疗效进行了对比研究，证实中药三七洗剂治疗婴儿急性湿疹效果显著。李东海等人4运用复方二藤洗剂（由黑面神、虎杖、三亚苦、大飞杨、忍冬藤、南蛇藤等组成）外洗治疗掌跖脓疱病38例。广东

7、省由于所处的地理位置和气候适合各类病菌的生存和繁衍，因此会成为多类皮肤病高发区。作为皮肤病高发的地域，在长期和皮肤病斗争的过程中，广东民间传统中医积累了大量宝贵经验。很多中药处方在防治皮肤病的过程中发挥了重要作用。如90年代运用自拟处方（黑面神、蛇床子、三亚苦、苦参、七大姑、荆芥、野菊花等各30g，白藓皮20g，布渣叶6g）医治面部激素依赖性皮炎，每次水煎煮后外洗，每日34次。结果显示，与对照组相比较疗效明显增强。近几年来广东地区皮肤病患者的人数在逐年增多，皮肤病的主要用药如抗病毒药、抗真菌药、抗变态反应药等具有较显著的副作用。中药在变应性接触性皮炎的治疗中显示出一定优势。但价格低廉、含中药有

8、效成分的皮肤外用药种类却很少。因此开发出使用方便、安全有效且价格便宜的中药制剂有着迫切的市场需求。 复方黑面神软膏由黑面神、苦参、蛇床子、白鲜皮和五味子五味中药组成，具有消炎和止痒的功效，对各类皮肤病有较好的治疗作用。本课题的前期药理实验已证实5，君药黑面神全株水提液具有显著的抗炎止痒作用、免疫抑制作用、抗皮肤型超敏反应作用。 为了较好地控制复方黑面神软膏的质量，文中对成品中黑面神等每味药进行薄层色谱鉴别，并建立HPLC法测定成品君药黑面神中表儿茶素和臣药苦参中苦参碱的含量,方法简便，准确度高，重现性好。所探索的技术路线符合现代技术要求，可为黑面神其他剂型的开发研究提供借鉴。2 材料与仪器2.

9、1 仪器 Agilent 1100 series高效液相色谱仪；BS224S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司 d=0.0001g）；jj200型电子天平（常熟市双杰测试仪厂）；电子JA-1203天平（上海天平仪器厂 d=0.001g）；DK-8D电热恒温三孔水槽（上海跃进医疗械器有限公司）；UV-2550型紫外-可见分光光度仪（日本岛津）；KQ3200E医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HH-S4数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）；RE-2000B型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHB-型循环水真空泵（巩义市英峪华中仪器厂）；东方一A型直热式电热恒温干燥箱（广州东方电热干

10、燥设备厂）；Good see-薄层色谱摄影仪（上海科哲生化科技有限公司）。2.2 试药 黑面神枝叶购自广州至信药业有限公司，经广州中医药大学生鉴定教研室黄海波教授鉴定为大戟科黑面神属植物Breynia fruticosa(L.)Hook.f.的干燥嫩枝叶，表儿茶素对照品（批号：110878-200102),苦参碱对照品（批号：0805-9804），苦参对照药材（批号：121019-201407），蛇床子对照品（批号：110822-200305），蛇床子对照药药材（批号：121030-200405），白鲜皮对照药材（批号：978-9301）地肤子对照药材（批号：121148-200803）均为中

11、国药品生物制品检定所提供。甲醇，色谱纯；水为屈臣氏蒸馏水,磷酸为分析纯。3 方法3.1定性鉴别（1）称取复方黑面神软膏5g，再加甲醇20mL,放置1h,滤过,滤液浓缩至5mL,作为黑面神供试品溶液。另外取黑面神对照药材同法制成对照药材溶液以及同法制成阴性样品溶液。再取表儿茶素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液，最后吸取上述四种溶液各10L,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（1:2:0.2:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以25%磷钼酸乙醇溶液，在110加热至斑点显色清晰。供试品溶液在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性

12、样品无干扰。（2）称取复方黑面神软膏5g，加浓氨试液0.3mL，加三氯甲烷25mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为苦参供试品溶液；另取苦参对照药材同法制成对照药材溶液，再取与供试品相应量的苦参阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。最后取苦参对照品适量，加乙醇制成0.2mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年一部附录VIB）试验，吸取上述溶液各4L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-氨水（5.2:0.7:0.6）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良的碘化铋钾试液，热风吹干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显

13、相同的橙色斑点。 （3）称取复方黑面神软膏3g，加乙醇50mL超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液，另取蛇床子对照药材4g加水100mL煮沸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5mL同法制成对照药材溶液，再取与供试品相应量的蛇床子阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液，最后取蛇床子对照品溶液，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述四种溶液各6uL分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视，供试品

14、色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。（4）称取复方黑面神软膏4g，加甲醇30mL超声处理20min，滤过，滤液加中性氧化铝（100-200目）1.5g振摇2min滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液，取与供试品相应量的白鲜皮阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液，另取白鲜皮对照药材1g加水40mL煮沸并保持微沸30min脱脂棉滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解作为对照药材溶液，取上述3种溶液各5L分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制成的硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-浓氨水（20:20:1）的上层液为展

15、开剂，展开，取出，晾干，以10%的硫酸乙醇溶液显色，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。（5）称取复方黑面神软膏5g，加乙醇40mL，盐酸3mL，加热回流2h，静置，倾出上清液，清液浓缩至约5mL，加水20mL，混匀，置分液漏斗中，加石油醚（60-90）振摇提取2次，每次约20mL，合并醚液，蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取地肤子对照药材2g，同法制成对照药材溶液，再取与供试品相应量的地肤子阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层层析法（中华人民共和国药典2010年版1部附录VI B）试验，吸取上述3种溶液各5L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-氯仿（20:8:5）为展开剂，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。3.1.1 黑面神的薄层鉴别参照金芥麦配方颗粒的质量8进行方法的建立。本次将展开剂定为甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（1:2:0.2:0.1），显色剂为25%磷钼酸乙醇溶液并与显色剂用10%硫酸乙醇作比较。供试品按上述方法处理展开显色后，薄层色谱中供试品与表儿茶素对照品特征成分斑点对应性好，斑